Polizelle SR, Navarezi IF, da Silva MCC, Vieira GC, Gaeth LM, Brandão-Souza LS, Acacio BR, Jorge-Neto PN, Silva EVDCE, de Deco-Souza T, Pereira AF, de Araujo GR. · Animal reproduction · 2026

Cryopreservation of jaguar (<i>Panthera onca</i>) fibroblast-like cells in straws and cryovials: a comparison of rapid and slow-freezing protocols.

Resumo em português

Células somáticas servem como recursos genéticos essenciais para biobancos. Tradicionalmente, células fibroblastoides do jaguar (Panthera onca) são congeladas em criotubos usando protocolos de congelamento lento. Entretanto, essa abordagem exige acesso a congeladores de temperatura ultrabaixa e requer considerável capacidade de armazenamento. Este estudo teve como objetivo avaliar a eficácia de um protocolo de congelamento rápido como alternativa viável para o congelamento de fibroblastos do jaguar. Após cultivo até a terceira passagem, as células foram congeladas utilizando congelamento lento (CL) ou congelamento rápido (CR). Para CL, as células foram congeladas em criotubos (-1 ºC/min), enquanto o CR envolveu congelamento rápido (-60 ºC/min) usando vapor de nitrogênio e armazenamento em palhetas de 0,25 mL. Após o descongelamento, as células foram recultivadas para avaliar a recuperação. A viabilidade celular foi avaliada por microscopia de luz (Trypan blue), microscopia de fluorescência (acridina laranja + iodeto de propídio) e citometria de fluxo (Hoechst 33342 + iodeto de propídio) imediatamente após o descongelamento e ao alcançar confluência (> 80%). A viabilidade das culturas frescas avaliada por Trypan blue, acridina laranja e citometria de fluxo foi de 98,2 ± 0,3%, 88,7 ± 3,9% e 94,2 ± 2,2%, respectivamente. Não foram observadas diferenças significativas na viabilidade entre CL e CR imediatamente após o descongelamento ou após cultivo subsequente. Todos os três ensaios revelaram diferenças significativas (p > 0,05) entre células frescas e congeladas-descongeladas. Esses resultados indicam que o CR em palhetas é uma alternativa viável ao CL para a criopreservação de fibroblastos do jaguar, oferecendo densidade de armazenamento otimizada para bancos de recursos genéticos.

Resumo original em inglês

Somatic cells serve as essential genetic resources for biobanking. Traditionally, jaguar fibroblast-like cells are frozen in cryovials using slow-freezing protocols. However, this approach necessitates access to ultra-low temperature freezers and requires substantial storage capacity. This study aimed to evaluate the efficacy of a rapid-freezing protocol as a feasible alternative for the freezing of jaguar fibroblasts. Following cultivation to the third passage, cells were frozen using either slow-freezing (SF) or rapid-freezing (RF). For SF, cells were frozen in cryovials (-1 ºC/min), whereas RF involved rapid-freezing (-60 ºC/min) using nitrogen vapor and storage in 0.25 mL straws. Post-thaw, cells were re-cultured to assess recovery. Cell viability was assessed via light microscopy (Trypan blue), fluorescence microscopy (acridine orange + propidium iodide), and flow cytometry (Hoechst 33342 + propidium iodide) immediately post-thaw and upon reaching confluency (> 80%). Fresh culture viability assessed by Trypan blue, acridine orange, and flow cytometry was 98.2 ± 0.3%, 88.7 ± 3.9%, and 94.2 ± 2.2%, respectively. No significant differences in viability were observed between SF and RF immediately post-thaw or after subsequent cultivation. All three assays revealed significant differences ( p p > 0.05) between fresh and frozen-thawed cells. These findings indicate that RF in straws is a viable alternative to SF for jaguar fibroblast cryopreservation, offering optimized storage density for genetic resource banks.

Espécies citadas

• Panthera onca · onça-pintada
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  Nomes populares variam entre regiões e uma mesma palavra pode designar espécies diferentes. Confira sempre o nome científico: Panthera onca.